Анализ мочи:

15.05.2009

Анализ мочи: сравнение результатов, полученных с использованием тест-полосок, с результатами количественных методов

Kyong-Ah Yun, M.D.,Tae-Jin Han, M.D., Sail Chun, M.D.,and Won-Ki Min, M.D.

Department of Clinical Pathology, University of Ulsan College of Medicine and Asan Medical Center, Seoul, Korea

Перевод к.б.н. Куриляк О.А.

Введение

Диагностические полоски — удобный и репрезентативный метод массового исследования функции почек и мочевыводящих путей. В последнее время эти исследования мочи стали более объективными благодаря применению анализаторов мочи, которые заменили процедуру визуальной оценки тест-полосок [1].

Цель работы

Определение сопоставимости результатов определения различных аналитов в моче методом «сухой химии» (тест‑полоски Uriscan) и количественными методами.

Материалы и методы

Изучены 9 показателей состава мочи: белок, глюкоза, билирубин, уробилиноген, pH, относительная плотность, лейкоциты, эритроциты и нитриты.

Анализ мочи тест-полосками Uriscan и количественными методами выполняли в течение 1‑го часа после поступления биологического материала в лабораторию.

1. Анализ мочи с применением диагностических тест-полосок

Исследования проводились в соответствии с положениями инструкции к тест-полоскам. Каждую пробу мочи тщательно перемешивали перед анализом. Диагностическую полоску Uriscan погружали в мочу. Избыток мочи удаляли прикосновением к мягкой ткани, далее диагностическую полоску помещали на направляющую панель анализатора мочи «Uriscan PRO» (Yeongdong Diagnostics, Korea). Принцип действия прибора: интенсивность света, отраженного от поверхности полоски, регистрируется специальными датчиками прибора. В отраженном свете определяется доля трех основных цветовых составляющих, которая, наряду с компенсационной цветовой составляющей, используется для расчета изменения коэффициента отражения (КО в %). Последний показатель преобразуется в соответствующий интервал (в условных единицах +,-) или концентрацию, который и выводится на табло прибора.

Интервалы диагностических полосок Uriscan и соответствующие им концентрационные диапазоны определяемых показателей представлены в Таблице 1.

Таблица 1. Интервалы тест-полосок Uriscan (в условных единицах +,-) и соответствующие им концентрационные диапазоны аналитов, определяемым в моче

Интервал в условных единицах	Отрицательная реакция	±	1+	2+	3+	4+
Белок (мг/100 мл)	< 10	10	30	100	300	1000
Глюкоза (мг/100 мл)	< 100	100	250	500	1000	2000
Билирубин (мг/100 мл)	< 0,5		0,5	1,0	3,0
Уробилиноген (мг/100 мл)	< 1,0	1,0	2,0	4,0	8,0	12,0
Нитриты (мг/100 мл)	< 0,05		< 0,05
Лейкоциты (кл/мкл)	< 10	10	25	75	500
Эритроциты (кл/мкл)	< 5	5	7,5	20	40	50

Для определения лейкоцитов, эритроцитов, и нитритов в моче применяли также тест-полоски Combur—Test и анализатор мочи Miditron (Boehringer Mannheim GmbH, Mannheim, Германия).

2. Методы сравнения

2.1. Количественный анализ.

Используемые количественные методы исследования мочи и количество проанализированных образцов перечислены в Таблице 2.

Таблица 2. Количественные лабораторные методы и число исследованных образцов мочи, использованных для сравнительной характеристики с тест-полосками Uriscan

Показатель	Число образцов	Метод сравнения	Аналиатор (производитель)
Белок	510	Пирогаллоловый красный с молибдатом натрия	Cobas Integra 700 (Roche diagnostics)
Глюкоза	255	Глюкозооксидазный метод	Cobas Integra 700 (Roche diagnostics)
Билирубин	132	Билирубиноксидазный метод	Hitachi 747 autoanalyzer (Hitachi Inc.)
Уробилиноген	77	РеакцияЭрлиха	U-3210 spectrophotometer (Hitachi Inc.)
pH	324	PH-метр	Ion analyzer 250 (Ciba Corning Diagnostics Ltd.)
Относительная плотность	384	Рефрактометрия	N.O.W. Hand refractometer (Nippon optical works Co.)
Лейкоциты	752	Микроскопия мочевого осадка, другие тест-полоски	Combur-Test M (Roche diagnostics)
Эритроциты	751	Микроскопия мочевого осадка, другие тест-полоски	Combur-Test M (Roche diagnostics)
Нитриты	117	10	Combur-Test M (Roche diagnostics)

Для исследования на присутствие билирубина и уробилиногена использовали пробы мочи, в которых, по данным диагностических полосок Combur—Test, реакция на вышеуказанные соединения составляла более трех «крестов» (3+).

2.2. Микроскопическое исследование мочевого осадка.

Исследованы 752 пробы на наличие лейкоцитов и 751 проба — на наличие эритроцитов. Свежевыпущенную мочу осторожно перемешивали и в центрифужную пробирку помещали 12 мл мочи, после чего центрифугировали при 450 g в течение 5 мин. Надосадочную жидкость сливали таким образом, чтобы на дне пробирки осталось 0,4 мл осадка. Осадок осторожно перемешивали и одну каплю помещали на предметное стекло, накрывали покровным стеклом и микроскопировали. Количество форменных элементов просчитывали в 10 полях зрения при большом увеличении (в 400 раз). Далее рассчитывали среднее число форменных элементов крови в одном поле зрения.

2.3. Исследование нитритов.

Для 99 проб мочи сравнивали результаты микробиологического исследования и определения нитритов с применением тест-полосок.

Результаты и обсуждение

Белок

Выявлена хорошая корреляция между данными количественного метода и результатами определения белка в моче полосками Uriscan (r=0,91, p<0,001), результаты внутри одного интервала совпадали в 92,7%. В то же время в 26,5% всех проб мочи при определении содержания белка количественным методом по сравнению с тест‑полосками получены более высокие результаты. Причина несовпадения результатов в том, что диагностические полоски выявляют в моче только альбумин, тогда как при использовании количественного метода с пирогаллоловым красным и молибдатом натрия измеряется также содержание глобулина и гликопротеид Тамма—Хорсфалла [5].

Глюкоза

При оценке уровня глюкозы полосками Урискан выявлена хорошая корреляция между данными тест-полосок и результатами количественного метода (r=0,96, p<0,001), внутри одного интервала данные совпадали в 98,0%. Если концентрация глюкозы в моче превышает 50 мг/дл [6], чувствительность и специфичность достигают 98,4% и 95,5%, соответственно.

Билирубин и уробилиноген

По сравнению с другими показателями, между содержанием билирубина и уробилиногена в моче и данными количественных методов выявлена менее четкая корреляция (r=0,58, p<0,001, r=0,81, p<0,001). По мнению авторов, это объясняется меньшим числом образцов мочи, которое использовано для анализа, а также неравномерным распределением концентрации этих веществ в патологических пробах мочи. Кроме того, уробилиноген, присутствующий в моче, легко окисляется кислородом воздуха, в связи с чем реакция с реактивом Эрлиха протекает неадекватно. Так как для количественного измерения используют ручной метод, причиной ошибки может быть разное время дозирования реагента. Билирубин мочи быстро разрушается при контакте с кислородом воздуха [7].

рН мочи

Диагностические полоски Uriscan позволяют измерить рН мочи с точностью до 0,5, pH‑метр — с точностью до 0,1. Между результатами изменения с использованием полосок Uriscan и показателями pH‑метра установлена хорошая корреляция (r=0,96, p<0,001).

Относительная плотность

При измерении относительной плотности мочи, корреляция между данными, полученными с помощью диагностических полосок и рефрактометром, оказалась низкой (r=0,57, p<0,001); по мере увеличения относительной плотности мочи полоски дают более высокие результаты по сравнению с рефрактометром, то есть в 37,5% (144/384) всех исследований показания тест‑полосок отличались на один интервал и в 16,4% (163/384) всех анализов отличались на два интервала по сравнению с рефрактометром. Причиной низкой корреляции результатов, получаемых с помощью диагностических полосок Uriscan и рефрактометром, служит тот факт, что оба метода основаны на разных принципах. Принцип рефрактометрии заключается в том, что показатель рефракции пропорционален содержанию в растворе растворенных веществ. В то же время относительная плотность, измеряемая диагностическими полосками, зависит от числа ионов и буферной способности раствора. Поэтому при использовании тест‑полосок получают более низкие показатели относительной плотности по сравнению с фактическим величинами относительной плотности мочи, которая содержит большое количество белка или глюкозы [1, 6]. Так как при использовании тест‑полосок для измерения рН в сильно щелочной моче получают более низкие результаты по сравнению с рефрактометром, следует вводить соответствующую поправку, о чем говорится в инструкции, прилагаемой к наборам с диагностическими полосками Uriscan.

Лейкоциты

При выявлении микроскопической пиурии чувствительность диагностических полосок Uriscan составляет 63,6% (105/165) и не отличается от тест-полосок других производителей, в частности, Combur—Test (62,4%). При клинической манифестной пиурии, то есть более 11 лейкоцитов в одном поле зрения при большом увеличении (х400), чувствительность полосок Uriscan и Combur-Test достигает 98,3% (57/58) и 98,3% (57/58), соответственно, то есть результаты практически совпадают. В подобных случаях пиурия нередко сопровождается гематурией или слущиванием призматического эпителия, в зависимости от локализации патологического процесса, поэтому для анализа мочи врачу-лаборанту предоставляют дополнительную информацию об истории болезни пациента [9].

Эритроциты

В случае клинической манифестной гематурии, при которой выявляют более 3 эритроцитов в одном поле зрения (х400), чувствительность диагностических полосок Uriscan составляет 92,8%. В то же время, в 25% случаев (144/556), когда эритроциты в моче при микроскопии не определялись, или выявлялись в количестве менее 3 в одном поле зрения (х400), полоски диагностировали гематурию. Причина несовпадения результатов состоит в том, что метод выявления крови в моче с использованием тест-полосок основан на определении пероксидазоподобной активности гемсодержащих соединений. Таким образом, миоглобин или гемоглобин, которые не определяются при микроскопии, взаимодействуют с соответствующим участком полоски и при отсутствии видимых признаков гемолиза полоска регистрирует положительный результат. Положительные резельтаты при использовании тест-полосок получают также в тех случаях, когда с тест-полоской реагирует гемоглобин, который попадает в мочу из разрушенных эритроцитов при длительном хранении образцов после поступления биоматериала в лабораторию. Микроскопическая гематурия выявляется примерно у 38% здоровых лиц, поэтому при наличии изолированной микрогематурии рекомендуется подтверждать диагноз более трех раз [10]. В случаях гематурии, регистрируемой методом микроскопии, чувствительность тест‑полосок Uriscan составляет 92,8%, полосок Combur—Test — 93,8%.

Нитриты

Чувствительность диагностических полосок Uriscan и Combur—Test при проведении нитритного теста по сравнению с культурой мочи составляет 63,0% и 65,2%, соответственно. При исследовании тест‑полосками Урискан в 7‑ми пробах мочи из 17 образцов получены отрицательные результаты нитритного теста. Этот факт связан с тем, что такие бактерии, как Enterococcus spp., Streptococcus viridans, Candida spp., Lactobacillus, Morganella morganii, не содержали нитратредуктазу. Отрицательные результаты получены при анализе тех же самых 7 проб с помощью полосок Combur—Test. Таким образом, чувствительность и специфичность нитрит‑теста при использовании полосок Uriscan и Combur-Test составила 74,4%, 85,0% и 76,9%, 81,7%, соответственно, что указывает на аналогию этих диагностических систем.

Заключение

В данной работе установлена высокая степень корреляции между результатами, которые получают при анализе мочи диагностическими полосками Uriscan, и данными количественных методов, результатами микробиологических исследований и микроскопии мочевого осадка. По чувствительности и специфичности при выявлении микроскопической пиурии и гематурии, а также результатам нитритного теста, полоски Uriscan практически не отличаются от таких широко известных диагностических полосок, как, например, Combur—Test.

Литература

• Henry JB, ed. Clinical Diagnosis and Management by Laboratory methods. 20th ed.Philadelphia: W.B.Saunders Company, 2001:397.
• Kim K.D., Gu S.W., Kim E. J., Kim J.M., Kim J.H. and Kim J. K. Annual Report on External Quality Assessment in Urinalysis in Korea (2000). J.Clin.Path.And Quality Control. 2001;23(S1):S71-90.
• Jung W.R. and Son W.E. Evaluation of the Urine analyzer URiSCAN S‑300 and URiSCAN Gen 10SGL. J. Clin. Path. And Quality Control 1998:2:263-71.
• Kim Y.K., Kim K.C., Han S.K., Lim I.S. and Park Y.N. Laboratory Evaluation of Yeongdong's urine analyzer URiSCAN S‑300 and URiSCAN strip. J. Clin. Path. And Quality Control 1996:18:265-303.
• Orsonneau JL, Douet P, Massoubre C, Lustenberger P, Bernard S. An improved pyrogallol red-molybdate method for determining total urinary protein. Clin Chem 1989; 35: 2233-6.
• Gambke B, Kouri T, Kutter D, Nagel D, Vukovich T, Wdfers A.
  Multicentre evaluation of the urine analyzer Miditron Junior. Scand J
  Clin Lab Invest 1997; 57:605-11.
• Fetter MC and Rupe CO. Calibration of a strip test for urinary urobilinogen using a mercuric chloride assay with crystalline reference standards. Am J Med Technol 1981; 47: 729-35.
• Burkhardt AE, Johnston KG, Waszak CE, Jackson CE, Shafer SR. A reagent strip for measuring the specific gravity of urine. Clin Chem 1981; 28: 2068-72.
• Braunwald E, Fauci AS, ed. Harrison's Principles of Internal Medicine. 15th ed. New York: McGraw-Hill, 2001:267.
• Grossfeld GD, Wolf JS Jr, Litman MS, Hricak H, Shuler CL, Agerter DC, et al. Asymptomatic microscopic hematuria in adults: summary of the AUA best practice policy recommendations. Am Fam Physician 2001; 63:1145-54.